结果
用0.25 μmol/L的calcein AM负荷细胞，添加台盼蓝（0.25 μg/ml）以猝灭细胞外过多的calcein，上机检测细胞荧光：激发波长495 mm；发射波长530 mm。加入BIP并检测细胞荧光，2次荧光的差值即为LIP的变化量（△LIP）。本实验结果显示，DFO作用于HL- 60细胞24小时LIP的变化：对照组为42 754±2 399，10 μmol/KL组为 36 278±1 556，50 μmol/L组为 17 728±2 551，100 μmol/L组为 6 246±4 836，与对照组相比P＜0.05；DFO作用于K562细胞48小时LIP的变化：对照组为58 533±4 359，10 μmol/L组为 56 700±5 629，50 μmol/L组为 3 3570±5 250，100 μmol/L组为 10 800±4 509，与对照组相比P＜0.05。即DFO降低了K562及HL- 60细胞LIP（图1-3 ）。
讨 论
铁通过内吞膜转入胞浆后进入细胞内铁池，称之为可变铁池［3，5］。目前认为，细胞内可变铁池是指细胞内可被螯合的、参与氧化还原反应的那部分铁，具有以下功能：①转输细胞铁；②表达铁代谢相关基因（如TfR、FT）；③催化Fenton反应；④调节含铁蛋白的活性。Epsztejn等［3］首先报道了采用钙荧光素（calcein）测定细胞LIP的变化。calcein- AM是一种荧光染料，可以主动穿过细胞膜，一旦进入细胞，乙酰甲基化酯被分解，calcein游离出来。脱酯的calcein滞留在细胞浆中，发出荧光。在细胞内，calcein可以与Fe2+，3+结合，在生理pH条件下几乎不与其它金属离子结合，即使有很小量的结合，对添加铁螯合剂所增加的荧光几无影响。当铁与calcein结合后，荧光猝灭。铁和calcein的结合是可逆性的。在不同实验条件下，细胞内的LIP水平升高时，由于铁与calcein结合，荧光减弱。而LIP水平降低时，荧光就增加。因此，测定的荧光变化量可作为定量细胞LIP的标志。本实验结果显示，在DFO作用下，测定的K562和HL- 60细胞荧光值增加，表明DFO降低了细胞的LIP，且呈现时间及剂量依赖性。K562细胞荧光值和HL- 60细胞相比，后者变化比前者明显，可能与细胞内铁贮存量有关。
铁参与机体的许多生理病理过程［6，7］。已有的研究及相关研究显示，一定量的铁可促进肿瘤细胞生长，而铁螯合可诱导肿瘤细胞凋亡，并推测与铁螯合剂导致肿瘤细胞LIP的改变有关［8］，但由于缺少检测LIP的方法，则无法提供细胞铁LIP变化的直接证据。我们这里所介绍的方法的依据，是calcein与铁快速可逆结合的特性，而这种结合可很快达到平衡。添加铁螯合剂使细胞荧光增强，前后荧光的变化量即表示了细胞的LIP水平。该方法的建立，为探讨细胞铁在不同的病理生理变化及铁在细胞分化、凋亡中的作用，提供了一个比较可靠的检测手段。
【参考文献】
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