作者：陈宽林 方明明 孙国庆 赵同英
【关键词】 甲状腺素
【摘要】 目的 观察甲状腺素对SD大鼠胰岛B细胞凋亡核苷酸、Caspase-3、Bcl-2的影响，以阐明甲状腺功能亢进时合并糖尿病或葡萄糖耐量降低的可能病理机制。方法 末端标记dUTP（TUNEL）法观察SD大鼠胰岛B细胞凋亡核苷酸、免疫组织化学观察Caspase-3和Bcl-2的表达阳性率变化。结果 （1）小剂量甲状腺素对在体SD大鼠胰岛B细胞凋亡核苷酸、Caspase-3表达阳性率明显高于对照组（P＜0.01），而Bcl-2的表达率明显低于对照组（P<0.01），具有显著的诱导大鼠胰岛B细胞凋亡的作用；（2）同时甲状腺素喂饲后的大鼠胰腺腺泡细胞明显发生脂肪变性。结论 甲状腺素对在体大鼠胰岛B细胞具有明显诱导凋亡的作用，此作用在甲状腺功能亢进时对糖的代谢异常具有重要作用，可能是甲状腺功能亢进时合并糖尿病及糖耐量异常的重要的病理机制。
【关键词】 甲状腺素；B细胞；凋亡；TUNEL；Caspase-3
【Abstract】 Objective Patients with hyperthyroidism are mostly suffering from diabetes mellitus or impaired glucose tolerance，but the mechanism is uncertain by now，in order to research this we studied the role of low dosage of thyroxin to the apoptosis of pancreatic β cells in rats.Methods Observing the apoptotic nucleosides with terminal UTP nick end labelling (TUNEL), Caspase-3 and Bcl-2 with immunochemo histology of pancreatic β cells in rats.Results (1) Low dosage of thyroxin has the significant role to the apoptosis of pancreatic β cells in rats，the positive rates of apoptosis nucleosides, Caspase-3 and Bcl-2 expressions are higher compared to the normal ones respectively (P<0.01 respectively).(2) Low dosage of thyroxin has the role inducing the fatty degeneration of pancreatic acinar cells.Conclusion Thyroxin has the significant role to the apoptosis of pancreatic β cells in rats,and this effect maybe play a very important role in the mechanism to diabetes mellitus or impaired glucose tolerance in patients with hyperthyroidism.
【Key words】 thyroxin；B cells；apoptosis；TUNEL；Caspase-3
长期以来人们发现甲状腺功能亢进（简称甲亢）患者常常同时合并糖耐量异常或糖尿病，人们对此通常的解释是甲亢时由于脂肪和蛋白质的分解代谢加强而抑制了糖的分解代谢。事实是并非所有甲亢患者都合并有上述表现，而合并有上述表现者部分在甲亢控制后得到恢复，部分患者可能从此罹患糖尿病，因此上述解释可能只是其机制的一个方面。为了探讨是否存在其他机制，譬如是否与甲亢时过量甲状腺素诱导胰岛B细胞凋亡有关，笔者观察了小剂量甲状腺素喂饲后对正常大鼠胰岛B细胞凋亡的影响，结果显示小剂量甲状腺素不但可以诱导大鼠胰岛B细胞凋亡，而且还可引发胰腺腺泡细胞的脂肪变性，据此我们推测，此病理变化与甲亢时合并糖耐量异常或糖尿病的发病机制有关。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.1.1 实验动物 年龄3个月左右，体重210~240g的SD大鼠。购买后正常饲养1周，选择健康大鼠20只进行实验，雌雄各半。SD大鼠购自南京盛名科研动物中心。
1.1.2 试剂与药物 （1）TUNEL、Caspase-3及Bcl-2免疫组化试剂：购自武汉博士德（Boster）生物工程有限公司。免疫组化试剂采用即用型SABC试剂盒，产品编号SA1022。（2）甲状腺素（优甲乐）：德国默克公司生产临床用优甲乐（L-T4），生产批号3333101，进口药品注册号H20040357。
1.1.3 仪器 （1）大鼠饲养笼；（2）莱卡切片机、光学显微镜、加样器、烤箱、低温冰箱。
1.2 方法
1.2.1 动物分组、用药 SD大鼠购买后在室温、自然光条件下室内饲养1周，观察选择健康鼠20只，雌雄各半，随机分为实验组14只（E组，n=14），正常对照组6只（N组，n=6），标号分笼单独饲养。优甲乐以注射用生理盐水溶解，每日定时称重后E组按1μg/kg体重优甲乐灌胃，N组以相应剂量单纯生理盐水灌胃，每日1次，连续2周。实验期间常规专用大鼠饲料饲养（购自南京医科大学实验动物中心）。
1.2.2 染色及免疫组化 严格按相关试剂说明书要求进行，Caspase-3和Bcl-2抗原修复采用煮沸法。所有染色均经苏木素轻度复染。
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